基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆

基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆

简单的说一下：

扩增目的基因，比如通过PCR的方法。

PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。

转染大肠杆菌

筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法，就是在载体上，序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列，如果不被破坏，产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物，形成蓝色产物。如果有目的序列插入，这个酶就不能表达，形成的克隆就是白色的。

挑取阳性克隆，测序确认无变异和方向后，扩增质粒，提纯质粒。